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该酶标IsC的工作浓度应为1／1?600。?????棋盘滴定法选择包被抗原工作浓度：①用包被液将抗原由1：50开始作比倍稀释后进行包被，洗涤。②将强阳性参考血清、弱阳性参考血清和阴性参考血清用稀释液作1：100稀释，加样，保温、洗涤。③加按工作浓度稀释的酶标IsC抗体，保温、洗涤。④加底物显色。加酸终止反应后读取A值。⑤选择强阳性参考血清的A值为0．8左右、阴性参考血清的A值小于0．1的包被抗的稀释度作为工作浓度，从中选取**适工作浓度。?1．2夹心法测抗原?????在夹心ELISA法中，可用棋盘滴定法同时选择包被抗体和酶标抗体的工作浓度。①抗体免*球蛋白用包被缓冲液稀释至蛋白浓度为10．0、1．0和0．1微克／毫升，分别在ELISA板上进行包被，每一浓度包括3个纵行，洗涤。②在1个横行各包被孔中加入强阳性抗原液，另1横行加入弱阳性抗原液，第3横行加入阴性对照液，保温、洗涤。③将酶标抗体用稀释液稀释成3个浓度，例如1：1?000、1：5?000和1：25000。分别加入每个包被浓度的1个纵行中，保温、洗涤。④加底物显色。加酸终止反应后，读取A值。⑤以强阳性抗原的A值在0．8左右、阴性参考的A值小于0．1的条件作**适条件，据此选择包被抗体和酶抗体的工作浓度。缓冲液能够提供酶所需的适pH值，这对于酶的活性至关重要。湖北无酚红缓冲液报价
pbs缓冲液的配制配方是10X的PBS母液，然后再对其母液进行1:10稀释即可获得PBS缓冲液。PBS是磷酸盐缓冲液（PhosphateBufferSaline），是生物学实验室**常用的缓冲液之一。其主要成分包括：氯化钠（NaCl）、氯化钾（KCl）、磷酸氢二钠（Na2HPO4）和磷酸二氢钾（KH2PO4）。配制步骤：清洗干净所需烧杯、转子和量筒，向一个烧杯装少量去离子水（约100ml）并放入一个转子后放在称量天平旁备用；向另一个烧杯装约800ml去离子水并在微波炉或者水浴锅（65°以上均可）中加热。注意：由于实验室所购买的Na2HPO4常常带有二水、七水或者十二水，与之对应的重量分别为1.78g、2.68g、3.58g。向烧杯中加入预热的去离子水，烧杯放置在磁力搅拌器上搅拌溶解。用量筒定容到1L，保存备用。取100ml10X的PBS母液，加入900ml去离子水即可获得pH=7.4的PBS缓冲液（无需用pH计校准PH值）。上海HBSS缓冲液价格查询PBS缓冲液的pH值为7.2-7.4，与人体血液等渗，可以维持实验体系的pH值稳定。
PH计校正的标准缓冲液有几种？
ph计校正常用的三种标准溶液：pH分别为4.0、7.0和10.0一般4.0的可以用邻苯二甲酸氢钾体系配制，7.0的用磷酸二氢钾-磷酸氢二钠体系配制，10.0的用碳酸钠-碳酸氢钠体系配制，可以根据需要的缓冲容量确定浓度。校正pH计所用工具和原料：标准缓冲液（应选择与供试液pH值接近的标准缓冲液），目前标准溶液有7种，在我国一般使用以下3种溶液：(pH值在25℃时)1)邻苯二甲酸氢钾(KHC8H4O4)pH4.003；0.05M2)混合磷酸盐(Na2HPO4)：磷酸二氢钾和磷酸氢二钠混合盐溶液pH6.864；0.025M3)硼砂(Na2B4O7·l0H2O)pH9.182；0.01M
常用作缓冲溶液的酸类由弱酸及其共轭酸盐组合成的溶液具有缓冲作用。常见的缓冲体系有：1、弱酸和它的盐（如HAc---NaAc）2、弱碱和它的盐（NH3·H2O---NH4Cl）3、多元弱酸的酸式盐及其对应的次级盐（如NaH2PO4---Na2HPO4）的水溶液组成。而生化实验室常用的缓冲系主要有磷酸、柠檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tris（三羟甲基氨基甲烷）等系统，生化实验或研究工作中要慎重地选择缓冲体系，因为有时影响实验结果的因素并不是缓冲液的pH值，而是缓冲液中的某种离子。如硼酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐和三羟甲基甲烷等缓冲剂都可能产生不需要的化学反应。硼酸盐：硼酸盐与许多化合物形成复盐、如蔗糖。柠檬酸盐：柠檬酸盐离子容易与钙结合，所以存在有钙离子的情况下不能使用。磷酸盐：在有些实验，它是酶的抑止剂或甚至是一个代谢物，重金属易以磷酸盐的形式从溶液中沉淀出来。而且它在。三羟甲基氨基甲烷：它可以和重金属一起作用，但在有些系统中也起抑制作用。其主要缺点时温度效应。这点往往被忽视，在室温pH是，4℃时是，37℃时是，因此，4℃配制的缓冲液在37℃进行测量时，其氢离子浓度就增加了10倍。在，其缓冲能力极为不理想。 为了避免PBS缓冲液对人体的负面影响,建议使用时遵循正确的使用方法和容器规格,避免长时间或过量使用。
所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。3.苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到，苯酚平衡操作方法如下：①液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分融解。②加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色，有助于方便识别有机相。③加入等体积的1MTris-HCl（)，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。④重复操作步骤③。⑤加入等体积的MTris-HCl（)，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于。⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)配制方法：1.说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25:24:1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。如果加入的酸或碱量过多，缓冲溶液的缓冲能力会降低，pH值会发生变化。湖北无酚红缓冲液报价
酸和盐浓度等比例增减时，溶液的pH值不变。湖北无酚红缓冲液报价
3.高温高压**后，4℃保存。SolutionI(质粒提取用)组份浓度：25mMTris-HCl（),10mMEDTA,50mMGlucose配制量：1L配制方法：1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。2.高温高压**后，4℃保存。3.使用前每50ml的SolutionI中加入2ml的RNaseA（20mg/ml)。SolutionII(质粒提取用)组份浓度：200mMNaOH，1%(W/V)SDS配制量：500ml配制方法：1.量取下列溶液，置于500ml烧杯中10%SD50ml2NNaOH50ml2.加**水定容至500ml，充分混匀3.室温保存，此溶液保存时间比较好不要超过一个月注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌SolutionIII(质粒提取用)组份浓度：3MKOAc,5MCH3COOH配制量：500ml配制方法：1.称量下列试剂，置于500ml烧杯中。2.加入300ml去离子水后搅拌溶解。3.加去离子水将溶液定容至500ml。4.高温高压**后，4℃保存。MEDTA()组份浓度：MEDTA配制量：1L配制方法：1.称取gNa2EDTA·2H2O，置于1L烧杯中。2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌。3.用NaOH调节pH值至（约20gNaOH)。注意：pH值至，EDTA才能完全溶解。4.加去离子水将溶液定容至1L。5.适量分成小份后，高温高压**。6.室温保存。1MDTT组份浓度：1MDTT配制量：20ml配制方法：1.称取gDTT，加入到50ml塑料离心管内。2.加20ml的MNaOAc（)。湖北无酚红缓冲液报价
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