[VIP第1年] 指数:3
因为解冻时可能会有营养成份析出，影响培养效果。正常情况下于2~8℃避光保存，使用前从冰箱取出，放入室温进行平衡。通常的液体培养基有效期是6个月到12个月。液体细胞培养基尽量避免长期贮存，其中的谷氨酰胺会随着储存时间的延长而慢慢分解，如果细胞生长不良，可考虑检测培养基中的谷氨酰胺含量确定是否再补加谷氨酰胺。市售商业化液体细胞培养基有具体的有效期，对于使用干粉细胞培养基自行配制成液体以后，也应低温（2~8℃）贮存。除培养基中如谷氨酰胺易降解之外，培养基中的其他成份随着温度的升高也可能会发生降解或是析出。5.细胞培养基使用过程中常见问题分析由于大多数细胞适宜的pH为，偏离此范围可能对细胞生长产生有害的影响。但各种细胞对pH的要求也不完全相同，原代培养的细胞一般对pH变动耐受力差，无限细胞系耐受力强。因此，原代培养时，培养液中的缓冲系统就显得较为重要。一般的细胞培养基采用的都是平衡盐系统，但不同的培养基或是同一系列的培养基所用平衡盐系统不同，如199系列、MEM系列均有Hanks’系统的培养基及Earle’s系统的培养基。有些培养基不是上述常规的平衡盐系统，例如RPMI1640培养基、F12培养基。减血清培养基提高了细胞培养的重复性和可靠性。海南基础培养基采购
**早开发的基础培养基（minimalessentialmedium,MEM），其本质为含有盐、氨基酸、维生素和其他必需营养物的pH缓冲的等渗混合物。在此基础上，DMEM、IMDM、HAMF12、PRMI1640等各种合成细胞培养基被不断开发出来。常用合成培养基的配方此处不详细介绍，其特性及应用的范围见表1-2。表1-2常用合成培养基的特性及应用的范围培养基名称特性及应用范围199细胞培养基添加适量的血清后，可***用于多种细胞培养，并用于**学、*苗生产等。MEM细胞培养基MEM（MinimalEssentialMedium）培养基有含Earle's平衡盐的类型，也有含Hanks'平衡盐的类型；有高压**型的，也有过滤**型的；还有含非必需氨基酸的类型。是**基本、适用范围**广的细胞培养基。DMEM细胞培养基DMEM（Dulbecco’smodifiedMinimalEssentialMedium）是由Dulbecco在MEM培养基的基础上改良获得的，各成分份量加倍，分低糖（1000mg/L）、高糖（4500mg/L）两种类型。细胞生长快。附着稍差的肿*细胞、克隆培养用高糖效果较好，常用于杂交*的骨髓*细胞和DNA转染的转化细胞培养。IMDM细胞培养基IMDM（Iscove’smodifiedDMEM）是由Iscove在DMEM基础上改良，增加了几种氨基酸和胱氨酸量等。可用于杂交*细胞培养。四川DMEM/F12培养基代理商使用减血清培养基可以减少细胞培养中的血清干扰因素。
1/2cs生长培养基的培养结果为：马铃薯茎端在1/2cs生长培养基上的存活率为100％，培养16d的幼苗，表现为植株健壮、平均茎高、平均茎中粗为，叶色浓绿，根系发达、平均根数为8个。如图4所示。对比培养例4：将1/2cs基本培养基替换为1/2ms基本培养基，其余完全同培养实例4，1/2ms基本培养基的成分及用量如表1所示。1/2ms生长培养基的培养结果为：马铃薯茎端在1/2ms生长培养基上的存活率为100％，培养16d的幼苗，表现为植株健壮、平均茎高、平均茎中粗为，叶色浓绿，根系发达、平均根数为6个。如图4所示。培养实例4和对比培养例4的培养结果比较：马铃薯茎端在1/2cs生长培养基和1/2ms生长培养基上的存活率均为100％；在相同条件下培养16d时，与1/2ms生长培养基相比，1/2cs生长培养基中的幼苗长势更佳，其茎高、茎中粗、根的数量均优于1/2ms生长培养基。如图4所示。培养实例5：哥伦比亚型拟南芥叶片及根愈伤**诱导(1)拟南芥叶片愈伤**诱导培养基：cs基本培养基+，用超纯水溶解，。cs基本培养基的成分及用量如表1所示。(2)拟南芥根愈伤**诱导培养基：cs基本培养基+2,，用超纯水溶解，。cs基本培养基的成分及用量如表1所示。。
此法由巴斯德创立，用于酒类消毒而得名。目前用于牛乳消毒。方法有两种：一种为℃加热15秒，另一种为63-66℃加热30分钟。大多采用第一种方法。(2)煮沸法。在1个大气压下，水煮沸后温度达100℃，煮沸5分钟后可杀死一般**繁殖体。如于水中加入2%碳酸钠，可将其沸点提高至105℃，既可促进芽胞的杀灭，又可防止金属器皿生锈。(3)流通蒸气消毒法。又称常压蒸气消毒法，常用附诺(Amold)流通蒸气**器，利用1个大气压下100℃水蒸气进行消毒，10-30分钟后**繁殖体被杀死，但对芽孢作用不大。(4)间歇**法（fractionalsterilization）。采用间歇方式达到**目的。将**物品置于阿诺流通蒸气**器内，100℃加热15-30分钟，每日1次，连续3次。每次**后取出物品置37℃孵育箱过夜，致残存的芽胞发育成繁殖体，次日再通过流通蒸气**器加热而被杀灭。如此反复，既可杀灭芽胞，又可使不耐高温的物质免受影响。若某些物质不耐100摄氏度，则可将温度下降至75-80℃，每次加热时间延长到30-60分钟，常用血清凝固器对吕氏血清培养基和L-J培养基的**属此方法。(5)高压蒸气火菌法。利用密闭的耐高压蒸气**器(autoclave)，在蒸气不外溢的条件下，使锅内压力增高，随之蒸气温度也增高。通常在℃。F12培养基适用于复杂细胞培养实验。
在工作台上把已经冲洗干净的外植体浸入75％酒精中消毒30s，用无菌水冲洗3～4次，使用白猫漂白水和无菌水按1：4的体积比配制消毒液，将外植体放入消毒液浸泡40min。通过采用上述技术方案，这种方式对外植体消毒方法简单，能够**降低外植体的死亡率，消毒成活率较高。本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：在s1中，外植体选择为**绣球的枝芽饱满的半木质化枝条茎尖部分。综上所述，本发明包括以下至少一种有益技术效果：本发明通过液体**培养技术，以芽为原材料，获取方便，增殖倍率高达8～10倍，生根率达到95％以上，苗木规格整齐，性状保持稳定，同时节省成本，适合工厂化大规模生产质量绣球种苗。附图说明图1是绣球的液体培养基组培快繁方法的流程示意图。具体实施方式以下结合附图对本发明作进一步详细说明。实施例：参照图1，为本发明公开的一种绣球的液体培养基组培快繁方法，具体步骤如下：(一)、试验材料：供试材料采自江苏东郁植物科技有限公司苗圃的**绣球，品种为无尽夏(endlesssummer“bloomstruck”)，外植体选用当年生枝芽饱满的半木质化枝条茎尖部分。(二)、试验方法：绣球**培养过程按以下步骤进行：初代培养、继代培养、生根培养。。使用减血清培养基能提高实验的可重复性。西藏F12培养基常见问题
RPMI1640培养基在抗体生产和免疫研究中有重要作用。海南基础培养基采购
K+主要分布在细胞内液，细胞内K+对于***某些酶是必需的，并在调节细胞内环境的酸碱平衡上也有极重要意义。Ca2+在细胞外液中的作用是将**内部细胞之间相互粘着，在细胞内参与许多重要的细胞生理活动，如传导、参与肌肉细胞收缩等。在悬浮培养时，为了减少细胞的聚集和附着，要减少Ca2+的浓度。Mg2+是构成细胞间质的重要成分，对于细胞间相互稳定结合有很重要的意义。磷的化合物对细胞物质代谢和生理功能调控有重要作用。其他成分：肽、核苷、嘌呤等。可帮助细胞的克隆化培养及维持某些特殊细胞系的生长。分类低血清细胞培养基概述营养丰富的培养基是维持细胞活性及高密度生长的基础，营养缺乏容易引起细胞凋亡，新生牛血清中所含大部分营养成分可以通过化学成分明确的营养物质如氨基酸维生素等成分组合取代。低血清培养基营养成分大优于基础培养基，*需添加1％～5％新生牛血清，而对细胞生长、增殖、形态、活性和功能没有影响甚至有所改善。在国外低血清培养基早已有之，如Gibco等。但是他们的低血清培养基是在基础培养基中选择性的加入重组胰岛素（recombinantinsulin）、人源转铁蛋白（human(holo)tran-sferrin）以及牛血清白蛋白等，有些还包含一些生长因子。海南基础培养基采购
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