[VIP第1年] 指数:3
胰蛋白酶：（Trypsin）为蛋白酶的一种，是从牛、羊、猪的胰脏提取的一种丝氨酸蛋白水解酶。由223个氨基酸残基组成的单链多肽，主要切割赖氨酸和精氨酸羧基端。按干燥品计算，每1mg中胰蛋白酶的活力不得少于2500单位。作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在pH为、温度为37℃时，胰酶溶液的作用能力**强。使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。终止消化时，可用含有血清培养液终止胰酶对细胞的作用。有些细胞容易消化（如鸡胚原代成纤维细胞）可用胰酶进行消化，可以不加EDTA。 0.25%胰酶消化液（含有EDTA，含酚红）pH值为7.2-7.8。新疆进口胰酶大概价格多少
胰蛋白酶是一种肽链内切酶，属于丝氨酸蛋白酶家族，不仅可以水解碱性氨基酸（精氨酸或赖氨酸）羧基端的肽键，还可以水解由碱性氨基酸的羧基形成的酰胺键或酯键。胰蛋白酶可以从牛、猪等哺乳动物的胰脏提取，经过纯化后获得结晶，再制成冻干制剂。牛的胰蛋白酶有223个氨基酸，分子量为23800道尔顿，活性部位的丝氨酸残基是不可缺少的丝氨酸蛋白酶。胰蛋白酶溶于水，不溶于乙醇、甘油和三氯甲烷等有机溶剂。胰蛋白酶的等电点pH值为10.1，**适pH值范围在7.8~8.5左右，pH值大于9.0时不可逆失活。钙离子对胰蛋白酶的酶活具有保护和***作用。[1]新疆进口胰酶大概价格多少胰酶细胞消化液具有方便快速的特点。
(含)英文名:(含)储存条件:-20℃产品简介:胰蛋白酶(Trypsin)是由胰脏产生没有活性的胰蛋白酶原分泌到小肠后,小肠内的肠肽酶会活化该酶原,形成胰蛋白酶。胰蛋白酶的特点在于已经活化的胰蛋白酶,能够继续活化更多胰蛋白酶原,这种过程即自动催化。胰蛋白酶在小肠工作,它会将蛋白质水解为肽,进而分解为氨基酸,其**适温度约为37℃。胰蛋白酶-碳酸氢铵溶液()由、除菌。本试剂可以直接用于培养细胞的消化,或者一些组织的消化,通常室温下1min左右就可以消化大多数贴壁细胞。使用说明(*供参考):1.贴壁细胞的消化①吸除培养液,用无菌PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次,去除残余的血清。②加入少量胰蛋白酶-碳酸氢铵溶液(),略盖过细胞即可,室温放置。(不同的细胞消化时间有所不同)③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化;或者用***吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。④如果发现消化不足,则加入胰蛋白酶-碳酸氢铵溶液()重新消化。⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落。
胰酶的作用原理是什么呢？胰酶是一种蛋白酶，酶切位点是肽链的Lys或Arg两个残基的羧基端肽链，通过在特定位置上降解蛋白，使细胞膜上和培养皿结合处蛋白降解，从而使两者分离。这时细胞在自身内部细胞骨架的张力以及培养液表面张力的作用下成为球形。使用胰酶时需注意哪些细节问题？在使用胰酶（Trypsins）细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差，做流式时的CDMarker也可能会下降。胰酶进行分装时尽量分装成多瓶，并遵守3次左右用完和只装2/3体积的原则。因为冷冻保存时液体体积会膨胀，多次使用同一瓶胰酶反复冻融会降低消化效果并可能造成污染。胰酶适用于消化细胞间质较少的软组织和传代细胞，如胚胎、上皮、肝、肾等组织，但对于纤维性组织和较硬的*组织效果较差。胰酶消化效果主要与pH值、温度、胰酶浓度、组织块大小和硬度有关。胰酶细胞消化液具有方便快速的特点，通常室温消化1分钟左右就可以消化下大多数贴壁细胞。
一、EDTA-胰蛋白酶的配制实验简介：EDTA-胰蛋白酶的配制实验所需的EDTA是乙二胺四乙酸，一种金属螯合剂。它通常与胰蛋白酶结合使用。原因是钙和镁等金属离子会降低胰酶的活性，因此在使用胰蛋白酶消化液时应添加EDTA。它可以螯合这些离子并消除胰酶的**作用。二、EDTA-胰蛋白酶的配制实验所需材料及试剂：PBS,氢氧化钠,EDTA,三、EDTA-胰蛋白酶的配制实验步骤：1.磷酸酶的质量/体积比为％，即将。注意，尽量不要用水溶解，因为必须保持渗透压。％％，可根据细胞消化的难度进行调整。不需要EDTA，可以省略易于消化的细胞。EDTA对细胞粘附有影响，因此应大量使用。如果影响粘附，则必须将其用于消化，在用完全培养基终止消化后，离心并弃去上清液，然后添加完全培养基以进行培养以除去EDTA。如果不影响附着力，则不要离心。。用磷酸酶稀释PBS。4.请注意，血清可以阻止血浆酶的作用，但不能阻止EDTA。对于某些细胞，有必要在消化后停止离心。5.当pH约为8时，磷酸酶和EDTA**易溶解。在制备过程中，您可以先滴几滴氢氧化钠以将pH调整为8。请注意，磷酸酶会使溶液变酸，因此您应随时溶解时测量pH值。调整。请注意，不应添加过量的氢氧化钠，否则电池将无法承受碱的作用。胰酶可在-20℃下保存一年。新疆进口胰酶大概价格多少
胰蛋白酶溶液用于组织和单层细胞的解离。新疆进口胰酶大概价格多少
在组织细胞的体外培养和原代细胞培养中的组织细胞分散（将组织块制备成单个细胞悬液）以及传代细胞培养中，贴壁生长细胞的消化分散均要使用组织细胞消化液。常用的消化液为胰蛋白酶 (Trypsin) ，EDTA 等。胰蛋白酶是一种丝氨酸水解酶，它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切段，水解细胞间的蛋白质，破坏细胞间的连接，从而使组织或贴壁细胞离散成单个细胞。胰酶分散细胞的活性与组织或细胞的特性、胰酶浓度、温度和作用时间有关，在PH 8.0和37℃时，胰酶的作用能力**强，因此使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。一般常用胰酶的工作浓度为0.25%，而半贴壁细胞或对胰酶敏感的细胞常采用低浓度（0.05%）的胰酶进行细胞消化。由于EDTA能够螯合Ca2+和Mg2+，从而破坏细胞连接促进细胞的解离，因此在胰酶溶液中常常会加入一定量的EDTA混合使用，以增强解离效果。新疆进口胰酶大概价格多少
文章来源地址: http://jxhxp.m.chanpin818.com/swhg/qtswhg/deta_23295007.html
免责声明： 本页面所展现的信息及其他相关推荐信息，均来源于其对应的用户，本网对此不承担任何保证责任。如涉及作品内容、 版权和其他问题，请及时与本网联系，我们将核实后进行删除，本网站对此声明具有最终解释权。
