[VIP第1年] 指数:3
无血清培养基，一般是在合成培养基的基础上，加入成份完全明确的或部分明确的血清替代成份，达到既能满足动物细胞培养的要求，又能有效克服使用血清所带来问题的目的。无血清培养基中通常需要添加一些额外的组分，才能帮助细胞贴壁生长，包括以下几大类物质：1）促贴壁物质：一般为细胞外基质，如纤连蛋白、层粘连蛋白等。它们还是重要的分裂素以及维持正常细胞功能的分化因子，对许多细胞的繁殖和分化，起着重要作用。纤连蛋白主要促进来自中胚层细胞的贴壁与分化，这些细胞包括成纤维细胞、肉*细胞、粒细胞、肾上皮细胞、肾上腺皮质细胞、CHO细胞、成肌细胞等。2）促生长因子及***：针对不同细胞添加不同的生长因子。***也是刺激细胞生长、维持细胞功能的重要物质，有些***是许多细胞必不可少的，如胰岛素。3）酶**剂：培养贴壁生长的细胞，需要用胰酶消化传代，在无血清培养基中需含酶**剂，以终止酶的消化作用，达到保护细胞的目的。**常用的是大豆胰酶**剂。4）结合蛋白和转运蛋白：常见如转铁蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加量比较大，可增加培养基的粘度，保护细胞免受机械损伤。许多旋转式培养的无血清培养基都含有牛血清白蛋白。MEM培养基在细胞生物学研究中广泛应用。河北F12培养基技术指导
留点温度计标化合格后方可用于验证试验。检测前，需将温度计的**柱甩至40℃以下。每次监测后留点温度计的温差应存l℃之间，则说明**器内的温度分布是均匀的。**后的菌片应在严格无菌操作条件下放入**后的溴甲酚紫胨水培养基内56-60℃培养24-48小时，观察颜色变化。如培养基变为黄色，说明菌片中的嗜热脂肪芽胞杆菌尚未完全灭活，**仍可在培养基中生长，分解葡萄糖产酸变为黄色。如培养基颜色不变化仍为紫色，则说明芽胞已灭活。同时要用未经**的纸片放入培养基内作为阳性对照，不加纸片的空白培养基作为阴性对照。化学指示卡上的指示色块，在高压蒸气**时，由淡黄色变为黑色。随着颜色变化的深浅，并与对照色相比，可判断**效果是否达到要求。化学指示卡应在干燥处保存。遇潮会变色，影响**效果的观测。高压蒸气**必须使蒸气顺利进入**器内，与**物品接触，并将原有的冷空气排出方可达到**的效果。要进行空载热分布和满载热穿透力验证(满载时不超过总体积的2/3)。二种验证各重复三次，共做六次。5个点六次试验表明温度均在121℃，化学指示卡变黑；程度与对照色一致；培养基均未改变颜色，说明高压蒸气**效果合格。高压**器属于强检仪器，但强检只是对仪器物理参数的考核。宁夏基础培养基进口MEM培养基常用于多种哺乳动物细胞的体外培养。
但酚红在无血清细胞培养基中可能带来胞内钠/钾失衡，影响细胞生长。碳酸氢钠在细胞培养基中主要是作为缓冲系统，此外还具有调节渗透压的作用。通常产品使用说明中的碳酸氢钠推荐量是一个标准、安全量，是在科学的基础上根据实践经验所得。但是由于不同的细胞系（株）不同，同一株细胞适应环境也可能不同（细胞耐受性不同等），且存在的地域性水质差异等，在实际生产过程中也可稍作改动，但使用者需做相应的检测（理化及细胞生产试验等）。HEPES是一种非离子缓冲液，在pH～，在高浓度时对一些细胞可能**。HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠（g/L）共用，以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加。其安全浓度范围是10～25mmol/L。**酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是在没有葡萄糖的条件下，细胞也可以代谢**酸钠。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，4℃下放置1周可分解50%，使用中**好单独配制，置-20℃冰箱中保存，使用前加入细胞培养液中。
又能使培养基的破坏降低至比较低的工艺条件。许多实验研究结果表明，培养基在高温**的过程中，其营养成分的破坏在很大程度上可以用一级反应来描述其反应速度：式中—表示营养成分破环的速率，C：表示营养成分的浓度K'：为反应速度常数，1/s，应速度常数K'与温度的关系，可以使用阿累尼乌斯公式表示之：K'=A'exp-△E'/RT……（1）式中——：反应速度常数，1/S：反应的活化能（J/mol）R：气体常数，*J/mol*kT：反应的***温度，k同样，**过程中的反应速度常数也可以用下式表示出：K=A×exp[-E/RT]……（2）（1）、（2）式可以改写成下列形式：lg(k,2/k,1)=E,/R×(1/T1–T2)……（3）lg(k2/k1)=E/R×(1/T1–T2)……（4）（3）（4）的意义是指：反应的温度从T1升高到T2，其反应的速度常数分别从k,1增加到k,2；k1增加到k2；培养基的**过程实际上是营养成分破坏、菌体死亡的两个平行性反应，对于平行性反应，反应温度的提高，其两个平行性反应的速度常数都增加，但增加的幅度（大小）却不同，其比值可以表示为：lg(k2/k1)/lg(k,2/k,1)=E/E,……(5)实验证明：营养成分为破坏的反应的活化能E的值为E,=—*103J/mol；而菌体死亡的活化能E芽孢：E=418*103J/mol。无酚红培养基适用于对酚红敏感的细胞实验。
MEM低血清培养基的平衡盐系统也不是常规的平衡盐系统，该平衡盐系统的缓冲能力强于常规平衡盐系统的缓冲能力。细胞培养过程中pH值下降产生的原因有很多。在细胞生长非常快时，pH值通常下降得很快，此时可以通过及时传代、提高传代比例或降低血清量等方法进行解决。此外，培养瓶盖拧得过紧、NaHCO3缓冲系统缓冲能力不够、培养液中盐浓度不正确、**、酵母或***污染等也能导致pH值通常下降得很快。这时，可以通过以下几种方法解决：1）增加培养液中NaHCO3浓度或减少培养箱内CO2浓度。NaHCO3含量在；2)改用不依赖CO2培养液；3)适当松开瓶盖。在培养液中加HEPES缓冲液，使终浓度为10~25mM；4)在CO2培养环境中改用基于Earle’s盐配制的培养液，在大气培养环境中培养改用Hanks’盐配制的培养液；5)如果是污染造成的则丢弃培养物或用*****。酚红在细胞培养基中用作pH值的指示剂。一般情况下，可以通过酚红的指示作用判断培养基的pH值，但低血清或是无血清细胞培养基中酚红的含量与普通细胞培养基中的酚红含量不同，不能通过肉眼观察或通过经验来判定pH值，建议使用pH计进行测定。酚红通常对含血清的细胞培养基生产的生物制品质量并不会产生明显影响，也可通过纯化技术去除。无血清培养基为细胞提供了无血清的纯净环境。湖北基础培养基牌子
F12培养基提供了丰富的营养支持。河北F12培养基技术指导
可通过在细胞培养基中添加一些保护剂，降低细胞-气体和细胞-液体的表面张力，减少气泡的形成。4.细胞培养基的**及储存**方式及注意事项细胞培养基**的方式分为高压**和膜过滤**，不同的培养基由于其营养成份不同，**方式也可能不同。①高压**某些培养基（如MEM）可进行高压**，这类培养基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠，一般是在培养基高压**后才加入。另外可用耐高压的谷氨酸盐（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）代替L-谷氨酰胺。可高压**的培养基在121℃、15psi，15分钟的条件下完全可达到**效果及营养成分的**小损失，不需将**时间延长。绝大多数细胞培养基不适宜高压**。因培养液中常含有维生素、蛋白质、多肽、生长因子等物质，这些物质在高温或射线照射下易发生变性或失去功能，因而上述液体多采用过滤消毒以除去**。可供过滤**使用的滤膜很多，其材料多为polyethersulphone（PES）、尼龙、多聚碳酸盐、醋酸纤维素、硝酸纤维素、PTFE、陶瓷等。膜过滤**是当前较为常用及便捷的一种方法，常采用μm孔径的滤膜，部份采用μm孔径。与高压过滤方式相比，滤膜具有使用期限且价格较高，但对细胞培养基的营养成份破坏性较小。通常液体细胞培养基避免-20℃冻存。河北F12培养基技术指导
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